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用猪血提取无蛋白血清的技术要点

无蛋白血清是国内外医学临床上紧俏的生物化学药品。目前,日本、瑞士、英国、德国等是从小牛血液中提取,成品价格昂贵。利用猪血为原料提取,具有原料价廉、易得、操作技术易于掌握、设备可土可洋、生产成本低、经济效益十分显著等优点。

一、猪血的采集及除去蛋白

取健康猪的新鲜血液,在搅拌下加入其体积1%、浓度为2.5%的柠檬酸钠溶液抗凝。然后送入转速为3000转/分的小型高速离心机内离心15分钟左右,以除去沉淀物。所得的血浆加温至80±2℃保温5分钟,使血浆中蛋白受热变性而凝结。先用双层纱布过滤,将滤液再离心处理约15分钟,以除去热变性蛋白,收集上清液。

二、上清液的处理

按照上清液:85%乙醇=2:1的比例加乙醇,搅拌10-15分钟,然后离心分离除去沉淀蛋白。将所得的清液先于78℃下蒸馏回收乙醇,使之保持与加入乙醇之前的原液的体积相同;再按照1:1加入浓度为95%的乙醇搅拌均匀,重复进行沉淀、离心、蒸馏回收乙醇等过程一次。最后可得无蛋白血清粗品,此粗品可出售给有关药厂进一步提纯之用。

三、粗品的提纯

1、吸附脱杂:将上述粗品用1倍量(体积)的重蒸馏水加以稀释后,在充分搅拌下,加入其体积0.5%的事先于180℃烘箱中活化2小时的药用级活性炭,搅拌30分钟,并升温至80℃,趁热过滤;滤液再加入其体积1%的活性白土(可用白陶土经酸煮、洗涤、干燥、活化后制得)搅拌处理40分钟,并加热至80℃,趁热过滤,滤液待用。
2、树脂处理与交换:将新购的331*弱碱性环氧系阴离子交换树脂(旧牌号为:701*、330*)先用清水浸泡后,再用乙醇反复浸泡至无色。用清水洗涤至无乙醇气味后,用8%盐酸溶液浸泡使其PH值稳定在3左右(可用上海试剂三厂生产的精密试纸测定,下同);再用清水洗至PH=4左右,继以15%纯碱水溶液浸泡处理至PH=9以上。上述酸碱处理过程应重复1-2次。临用前先用水洗至PH=9左右,再用蒸馏水或去离子水洗至中性即可。将按上述程序和操作方法处理好的331*树脂缓缓加入至前述“1”的滤液中,搅拌即可进行离子交换作用,使滤液的PH=7左右,并复查其PH值稳定在7-7.2范围内之后,即可滤去树脂,保留滤液。收集好滤出的树脂,经再生处理后供下次应用。

3、后处理:将上述经树脂交换处理的无蛋白血清滤液,在100℃浓缩至原稀释前的体积。在搅拌下加入其体积0.4-0.5%的药用级活性炭(事先已经活化处理好的)搅拌处理30分钟,并升温至80℃,趁热过滤。将所得的滤液再用4号玻璃砂芯漏斗进行精密过滤,灌注于安瓿中后熔封,115℃热压灭菌30分钟以上。经冷却后,置于4℃下的冰箱中保存。

经上述工艺程序和操作方法所制得的猪血无蛋白血清纯品,按卫生部《生物制品规程》及《常用药物制剂》标准所规定的各项规定进行检验,均能符合有关规定

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