冬虫夏草的人工培养

    冬虫夏草是一种动植物结合在一起的生物体，自古以来被人们当作高级的滋补药膳。现代医学又发现，它有抑制癌症的作用。由于这种生物体在自然界非常稀少，因而价格昂贵。为了开发这种补品资源和研制新型抗癌药物，这里介绍冬虫夏草的人工培养法。
    一、冬虫夏草的人工培养法
    先把采集得到的天然冬虫夏草进行合理的灭菌，去除外壳上的水分（可用低温干燥），剥去外壳，把内部组织切成厚度为0．5～0．2厘米的薄片。把这种从虫草内部切出来的薄片作为原菌，将这种原菌经过培养和分离成为纯菌。分离培养时，要根据原菌的种类选择合适的培养基。通常是用葡萄糖等糖类、蛋白陈等蛋白质类、维生素类、核酸类中一种或几种主要成分配制成琼脂纯分离培养基。在这种培养基上接种虫草菌的原菌（即上面所说的组织切片）或孢子，然后放入5～15℃温度下进行培养。在这种温度范围内，可抑制杂菌生长，并有利于虫草菌丝细胞的分裂和生长。
    上面提到的分离培养基，也可用杀菌后的米饭来代替，还可以选择其它谷物作为这种固型物。采用米粒等立体固型培养基时，能更好地利用固体之间的氧气来加速其代谢活动，促进营养的吸收。为了鉴别菌丝是否是真正的虫草菌，可以观察是否生出子座，培养子座的过程，可通过下列步骤：
    首先把这种固体培养基中的菌丝移植到液体培养基乙酰内。移植的方法是，把一块带有菌丝的固体培养基移到液体培养基里，并充分振荡。然后用纱布过滤，将滤出的菌丝体（或带一少部分培养基）全部移植到液体培养基中进行培养。液体培养基的成分是：葡萄糖、柠檬酸等碳源、蛋白胨为氮源、维生素B₁、B₂、B₃等维生
素类、一磷酸腺苷、二磷酸腺苷，三磷酸腺苷等核酸类为主要成分，并添加赖氨酸或组氨酸、精氨酸、天冬酰氨。丝氨酸、合氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰氨基葡萄糖、唾液酸等。根据虫草菌的种类，通过实验来选择。
    在形成子座初期， pH值应为3或4至7，pH值接近4时，能加快菌丝的成熟和子座的形成，经过一定时间就可得到一定量的菌丝体，理想的培养温度为25℃。
    利用这种培养基来培养菌丝体，经过静止培养后，在培养液表面就漂浮繁殖菌丝细胞，形成粗糙而肥厚的菌层，即为菌座。子座就是在这种肥厚的菌座上生长出来的，菌座完全是由菌丝构成的。子座是在移植后20天左右开始形成的，到45天左右终止。原来长在固体培养基上的菌丝接种到液体培养基时，若接种量大，杂菌就
不易生长，虫草的菌丝繁殖就快。
    二、实例
    1．蛹虫草的人工培养法：
    （1）将采集得来的冬虫夏草经过灭菌处理，在洁净空气的环境中用蒸馏水加以洗净。在无菌的条件下，用低温烘干切取内部组织的切片或孢子作为原菌。
    （2）分离用的培养基成分为葡萄糖1.0％、蛋白胨0.1％、维生素B₁0.0l％、维生素B₂0.0l％、维生素B₁₂0.01％、一磷酸腺苷0.2％、二磷酸腺苷0.2％、三磷酸腺苷0.2％、柠檬酸0.04％、琼脂20.0％。在pH值为4和温度为15℃下，把原菌移入培养基里，用试管进行斜面培养，经30天可见子座形成。
    （3）经过纯分离培养的子座，在立体培养基里培养。这种立体培养基，可用分离培养基的成分（用米饭代替琼脂）。当出现子座时，就可以认为是纯的虫草菌。然后移入液体培养基中。
    （4）把得到的菌丝同培养基一同取出来，同水或培养液混合，振荡摇碎，然后用纱布过滤。滤液（即菌丝体和一些碎的基质）作液体培养用，pH值为个培养温度为25℃，培养基的成分采用前面的分离培养基成分，只是把琼脂换成水，并添加入0．5％的动物血即可。把它放入容量为1000毫升的三角瓶中，培养基的加入量为
50毫升，然后用牛皮纸罩把瓶口封上。
    （5）形成菌座后，就长出子座。子座和菌座的菌体组成成分是一样的，到45天，就可产菌3．0～8．5克，这种差异与菌种类别等条件有关。
    2．蜂虫草的人工培养：
    （1）灭菌处理过程同前。
    （2）培养基成分，把上述成分中的柠檬酸用0．08％的米酵母代替，再加入微量的几丁质和角蛋白，培养方法和上述相同。
    （3）纯分离与前面所述相同。
    （4）在液体培养基的成分中，将纯分离培养基中的琼脂用水代替，然后添加0．5％动物血。培养方法与前面相同。
    （5）经过液体培养后，到45天就可看到子座，产菌量为3．7～8．4克。
    其它种类虫草菌，也可采用同样方法进行人工培养。培养的结果及其生理特点和菌量，因其种类不同而有差异。